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ELISA檢測e抗原的原理

免疫原性是抗原zui重要的性質(zhì)，它主要取決于物質(zhì)本身的性質(zhì)及其與機(jī)體的相互作用。由于自然界中各種生物體都有其各自特異性的抗原，因此抗原性物質(zhì)的種類繁多，根據(jù)不同的標(biāo)準(zhǔn)可以對其進(jìn)行分類，分類方法也十分復(fù)雜。

E抗原是從乙肝表面抗原（HBsAg）陽性血清中發(fā)現(xiàn)的一種新抗原，他可能與乙型肝炎的傳染性有密切關(guān)系。李羽等報道用ELISA檢測e抗原的靈敏度比瓊脂免疫擴(kuò)散法高150—300倍。試驗程序：

1.病人免疫球蛋白IgG（e抗體）的提取：用飽和硫酸銨沉淀法處理上述抗體陽性人血清所得粗提液過柱（DEAE-Cellulose）收集IgG陽性部分，再穿流正常人血清柱。得IgG（e抗體），濃縮為5ng/ml貯藏放于冰箱中。

2.酶標(biāo)記IgG（e抗體）的制備：用戊二醛二步法，將10mg  HRP交聯(lián)5 mg  IgG（e抗體），分裝于小瓶，在低溫（-20°C）下保存。

3.ELISA對e抗原的檢測:

a. IgG（e抗體）包被聚苯乙烯微量反應(yīng)板，在4°C過夜（IgG濃度為25r/ml）。

b.洗滌3-5次。

c.加待檢病員血清（1:10稀釋，每份標(biāo)本加兩孔，每孔0.1ml,37°c孵育2h）.

e.洗滌3-5次。

f.加酶標(biāo)記IgG（e抗體），37°C孵育2h（酶標(biāo)記IgG稀釋度為1:640）。

g.洗滌3-5次。

h.加底物與供氫體（H2O2與OPD）,置于暗處反應(yīng)30min.

i.加2mol/L硫酸終止反應(yīng)。

j.每板均設(shè)陽性與陰性對照，根據(jù)不同的顯色反應(yīng)予以判斷。

k.經(jīng)過上訴方法檢測初步確定為陽性的標(biāo)本，取兩份，一份加足量的e抗體血清，另一份加正常人血清，在37°C孵育1h，然后再按上述方法測定e抗原。加e抗原體血清者，在顯色反應(yīng)受到控制（與正常血清對比）時才可判斷為e抗原陽性。

雖然ELISA法在理論上十分簡單，但每一步都有要注意的事項。不論是新設(shè)計的ELISA還是沿用其他ELISA方法都有以下幾方面技術(shù)要點：固相載體的選擇和試劑的制備，反應(yīng)條件和操作的標(biāo)準(zhǔn)化。